宿主细胞残留蛋白HCP详细介绍:
中(zhong)国仓鼠卵巢细(xi)胞(bao)宿(su)(su)主(zhu)蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)酶(mei)(mei)联检测试剂盒是用(yong)(yong)来定(ding)量(liang)(liang)分析以(yi)(yi)中(zhong)国仓鼠卵 巢细(xi)胞(bao)(Chinese Hamster Ovary cells,CHO)为(wei)表(biao)达(da)细(xi)胞(bao)的(de)(de)(de)(de)生(sheng)(sheng)物(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)药物(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)中(zhong)宿(su)(su)主(zhu)蛋(dan)(dan)白(bai)(bai) 杂质的(de)(de)(de)(de)试剂盒。首(shou)先,用(yong)(yong)不同浓度的(de)(de)(de)(de)CHO标(biao)(biao)(biao)准蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)制作一(yi)条标(biao)(biao)(biao)准曲(qu)(qu)(qu)线,然(ran)后再(zai)根 据标(biao)(biao)(biao)准曲(qu)(qu)(qu)线来分析生(sheng)(sheng)物(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)药物(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)中(zhong)宿(su)(su)主(zhu)细(xi)胞(bao)残留蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)的(de)(de)(de)(de)含量(liang)(liang)。具(ju)体方法为(wei):先将CHO 标(biao)(biao)(biao)准蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)或者待测样品适(shi)当稀释(shi)后加(jia)入已包被(bei)好抗(kang)CHO宿(su)(su)主(zhu)蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)抗(kang)体的(de)(de)(de)(de)96孔平(ping) 板(ban)中(zhong)。经过(guo)(guo)1.5小时的(de)(de)(de)(de)保(bao)温(wen),宿(su)(su)主(zhu)细(xi)胞(bao)蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)与已经固定(ding)在平(ping)板(ban)上的(de)(de)(de)(de)抗(kang)体结(jie)(jie)(jie)(jie)合(he)(he)形成 抗(kang)原-抗(kang)体复(fu)(fu)合(he)(he)物(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)。此复(fu)(fu)合(he)(he)物(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)被(bei)随后加(jia)入的(de)(de)(de)(de)生(sheng)(sheng)物(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)素(su)标(biao)(biao)(biao)记(ji)的(de)(de)(de)(de)抗(kang)CHO宿(su)(su)主(zhu)蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)的(de)(de)(de)(de)抗(kang)体 结(jie)(jie)(jie)(jie)合(he)(he)并进(jin)一(yi)步形成更高级(ji)的(de)(de)(de)(de)复(fu)(fu)合(he)(he)物(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(wu),反(fan)(fan)(fan)应(ying)45分钟(zhong)后洗去未结(jie)(jie)(jie)(jie)合(he)(he)的(de)(de)(de)(de)物(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)质。再(zai)加(jia)入链 霉(mei)亲合(he)(he)素(su)-辣根过(guo)(guo)氧化(hua)物(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)酶(mei)(mei)复(fu)(fu)合(he)(he)物(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(wu),静置30分钟(zhong)。因链霉(mei)亲合(he)(he)素(su)可以(yi)(yi)与任何带生(sheng)(sheng) 物(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)素(su)标(biao)(biao)(biao)记(ji)的(de)(de)(de)(de)抗(kang)体相结(jie)(jie)(jie)(jie)合(he)(he),从而使链霉(mei)亲合(he)(he)素(su)-辣根过(guo)(guo)氧化(hua)物(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)酶(mei)(mei)复(fu)(fu)合(he)(he)物(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)连接到平(ping)板(ban) 上。接下(xia)来冲(chong)洗掉(diao)未结(jie)(jie)(jie)(jie)合(he)(he)的(de)(de)(de)(de)物(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)质,加(jia)入TMB底(di)(di)物(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)。固相上的(de)(de)(de)(de)酶(mei)(mei)催化(hua)底(di)(di)物(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)产生(sheng)(sheng)颜色(se) 反(fan)(fan)(fan)应(ying),待颜色(se)反(fan)(fan)(fan)应(ying)一(yi)段时间后,终止反(fan)(fan)(fan)应(ying)。用(yong)(yong)酶(mei)(mei)标(biao)(biao)(biao)仪在450 nm波长下(xia)测定(ding)其结(jie)(jie)(jie)(jie)果, 此结(jie)(jie)(jie)(jie)果能间接地反(fan)(fan)(fan)应(ying)结(jie)(jie)(jie)(jie)合(he)(he)到平(ping)板(ban)上的(de)(de)(de)(de)的(de)(de)(de)(de)宿(su)(su)主(zhu)细(xi)胞(bao)蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)数量(liang)(liang)的(de)(de)(de)(de)多(duo)少。根据CHO宿(su)(su)主(zhu) 蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)标(biao)(biao)(biao)准曲(qu)(qu)(qu)定(ding)量(liang)(liang)分析生(sheng)(sheng)物(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)药物(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)中(zhong)宿(su)(su)主(zhu)细(xi)胞(bao)残留蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)的(de)(de)(de)(de)含量(liang)(liang)。
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